Quando nel 1935 l’illustre direttore d’orchestra Tullio Serafin prese l’incarico di direttore artistico del Teatro Reale dell’Opera formò un coro di novanta elementi, organico mantenuto nel numero dall’attuale. Questo complesso è da sempre parte fondamentale della vita artistica del Teatro e della città, dando lustro alle grandi stagioni del ’900, a quelle estive di Caracalla iniziate nel 1937, fino agli eventi importanti dei giorni nostri tra i quali la celebrazione del centenario di Tosca di Giacomo Puccini, trasmessa da Rai Uno il 14 gennaio 2000.
Impegno principale del Coro del Teatro dell’Opera è il repertorio operistico che spazia dal ’700 alla musica contemporanea, tuttavia non ha mancato di distinguersi in pregevoli esecuzioni del panorama sinfonico e sacro, grazie alle collaborazioni con i più celebri direttori d’orchestra quali Arturo Toscanini, Victor De Sabata, Gianandrea Gavazzeni, Herbert von Karajan, Carlo Maria Giulini, Giuseppe Patanè, Zubin Mehta, Leonard Bernstein, Georges Prêtre, George Solti, Giuseppe Sinopoli, Daniel Oren, Gianluigi Gelmetti con il quale ha inciso Iris di Pietro Mascagni e La fiamma di Ottorino Respighi. Durante le stagioni 2008 e 2009 Riccardo Muti ha diretto il complesso nelle opere Otello e Iphigenie en Aulide.
Tutte di prestigio le tournée in Giappone, a Hannover per l’Expo 2000, al Cremlino nel 2003, a Sydney nel 2004 con la Messa di Requiem di Giuseppe Verdi diretta dal maestro Gelmetti, con i complessi della Sidney Opera House.
Il livello di questa compagnia è sempre stato assicurato dalla preparazione di rinomati direttori di coro come Roberto Benaglio, Giuseppe Conca, Gianni Lazzari, Tullio Boni, Augusto Parodi, Giuseppe Piccillo, Alfredo D’Angelo, Vittorio Rosetta, Ime Meister, Romano Gandolfi, Norberth Balatsch, Marcello Seminara.
Dall’ottobre del 2000 all'agosto 2010 ne è stato direttore il Maestro Andrea Giorgi e a partire da settembre 2010 ha assunto la direzione il Maestro Roberto Gabbiani.